反转录酶能够以单链RNA或单链DNA为模板,在引物的引发下合成一条互补的DNA链。以 RNA 为模板合成的 DNA 是互补 DNA(complementary DNA,cDNA)。若是以DNA模板合成 DNA,dNTP 的掺人速度很低(约 5个核苷酸/秒),比 T7DNA聚合酶的合成速度差不多低 100 倍。
以RNA为模板,,用反转录酶可同时产生单链和双链的 cDNA,双链 DNA是由自身引物引导合成。但这种自身引物引导的合成效率远低于外加寡核苷酸引物引导的合成。
在细菌质粒 pBPI的四环素抗性基因 tetR的中间有一个 HindⅡ的切点。用 Hind Ⅲ切割果蝇基因组 DNA,以 pBPl 为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆 15 带有果蝇的目的基因。用 Hind Ⅲ和 EcoRV对克隆 15 进行了酶切分析,电泳结果如图 15.1(用酶切的 pBPl质粒 DNA作对照),旁边标出了片段的大小。 如果用克隆在另一个与 pBPl完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针进行 Southern 印迹杂交,预测上述电泳图会出现什么样的杂交带?
RT-PCR中,若以oligo(dT)为引物合成cDNA第一链,需要的模板是()。
cDNA合成及克隆的基本步骤包括用反转录酶合成cDNA第一链,聚合酶合成cDNA第二链,加入合成接头以及将双链DNA克隆到适当()
人的超氧化物歧化酶hSOD是1种使超氧化物的O2-转化成过氧化物O22-的1种非凡的酶,它抗热、且对蛋白酶和对去污剂稳定。它的功能引起医学界的兴趣,把它用在由于氧化作用的损害引起的人的各种综合症。你可将编码这个酶cDNA克隆,获得大量SOD产物。你选择哪个克隆该基因的最适载体(使人的超氧化物歧化酶SOD基因克隆到的DNA分子)?()
基因组 DNA文库是含有某一生物中全部 DNA 序列随机克隆的克隆群,而 cDNA 文库是含有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。
cDNA 克隆
通过差示杂交后制备的 cDNA 文库使克隆那些只在特定分化细胞中表达基因的机率大为提高。
cDNA基因克隆采用的模板为()
能以RNA为模板催化合成与RNA互补的DNA(CDNA)的酶称为
cDNA克隆与基因组克隆有何不同?
能以RNA为模板催化合成与RNA互补的DNA(cDNA)的酶称为()。
cDNA 克隆较之基因组克隆最重要的优越性就是它们含有一个基因的完整序列。
以mRNA为模板合成cDNA的酶是
以mRNA为模板合成CDNA时,所用的工具酶是()
能以RNA为模板催化合成与RNA互补的DNA(cDNA)的酶称为
3、将目标性状位点精确定位在分子标记连锁图谱上,利用与性状位点紧密连锁的分子标记筛选大片段的DNA文库,构建含目的基因区域的精细物理图谱,采用染色体步行法逼近目的基因,获得含目的基因的大片段克隆,采用亚克隆分析或探针筛选cDNA文库,将目的基因确定于较小片段上,最后对目的基因进行克隆以及功能鉴定从而获得目的基因的方法称为()。
EST是______,是通过从cDNA文库中随机挑选克隆,进行一轮单向测序所获得的序列,通常为几十到500bp左右,他们大多不是完整的基因序列,但携带了表达基因的部分遗传序列。
1、以mRNA为模板合成cDNA的酶是
1、以RNA作模板,催化合成cDNA第一条链的酶是
52、以下不会出现在一个cDNA克隆中的序列是()
能以RNA为模板催化合成与RNA互补的DNA(cDNA)的酶称为()