迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链 DNA,又能作用于单链 DNA。
限制性内切核酸酶 BglⅡ识别的序列为 A GATCT,BamHI 识别的序列为 GGATCC,用它们分别切割载体 DNA和供体 DNA,不必使酶失活,就可以直接通过黏性末端连接法进行连接。
如果限制性内切核酸酶的识别位点位于 DNA分子的末端,那么接近末端的程度也影响切割,如 HpaⅡ和 MboI要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。
由于 DNA是由 4 种碱基组成的,所以任何限制性内切核酸酶的切割频率的理论值应该是()。
用限制性内切核酸酶 HaeⅢ分别切割载体 DNA 和供体 DNA 后,可用 E.coli DNA连接酶进行连接。
限制性核酸内切酶,简称限制酶,是一类能识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列,并在识别序列内或附近切割DNA双链结构的核酸酶。限制性核酸内切酶切割DNA后不会产生()
用不同的产生黏性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源 DNA,得到的黏性末端是不亲和的黏性末端。
Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小.一般在 20~40kDa,通常由()亚基所组成。它们的作用底物为双链 DNA,极少数Ⅱ类酶也可作用于单链 DNA,或 DNA/RNA 杂合链。这类酶的专一性强,它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求,而且对更远的碱基也有要求,因此,Ⅱ类酶既具有()专一性,也具有()的专一性,一般在识别序列内切割。切割的方式有(),产生()末端的DNA片段或()的DNA片段。作用时需要()作辅助因子,但不需要()和()。
用限制性内切核酸酶切割载体、供体 DNA后,要加入 EDTA-SDS中止液使限制性内切核酸酶失活,这样有利于重组连接。
同一种限制性内切核酸酶切割靶 DNA,得到的片段的两个末端都是相同的。
限制性核酸内切酶,简称限制酶,是一类能识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列,并在识别序列内或附近切割DNA双链结构的核酸酶。限制性核酸内切酶可分为多种类型,其中应用最广的是()
用一限制性内切核酸酶切割 Lac+Tetr的质粒载体,已知该酶识别的是4个碱基序列,并产生有两个碱基突出的单链末端,该酶在 lac 基因内有切割位点,并在第二个氨基酸密码子内,该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后,用 DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端,然后重新连接成环,转化 Lac-Tets受体菌,筛选 Tet 转化子,问:Lacr的基因型是什么?并说明原因。
1970 年,Smith 和 Wilcox 从流感嗜血杆菌中分离到一种限制酶,能够特异性的切割 DNA,这个酶后来被命名为(),这是第一个分离到的Ⅱ类限制性内切核酸酶。
用相同的限制性内切酶切割DNA留下的粘性末端是一定()的;用不同的限制性内切酶切割DNA留下的粘性末端一定是()的。
目的基因和载体的互补末端一定是用同一种限制性核酸内切酶切割产生
粘性末端产生的途径之一,是限制性核酸内切酶通过()DNA产生的
限制性核酸内切酶切割DNA时可产生:
限制性核酸内切酶切割DNA后可产生
平头末端产生的途径之一,是限制性核酸内切酶通过()DNA产生的。
限制性核酸内切酶切割 DNA 时可产生:
限制性核酸内切酶切割 DNA 后产生
限制性核酸内切酶切割双链DNA后产生特殊末端,即 末端和 末端。
限制性核酸内切酶主要来源于_______,能识别双链DNA中_______,并同时断裂_______。这类酶可分为两大类,只有第_______类限制性内切酶广泛用于基因操作。
某限制性内切核酸酶按AATTAATT方式切割,产生的末端突出部分含:()