限制性内切核酸酶 BglⅡ识别的序列为 A GATCT,BamHI 识别的序列为 GGATCC,用它们分别切割载体 DNA和供体 DNA,不必使酶失活,就可以直接通过黏性末端连接法进行连接。
重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括:分(目的基因的分离)、切(限制性内切酶切割目的基因和载体)、接(目的基因和载体连接)、转(连接产物导入受体细胞)、筛(筛选阳性重组子)。将重组DNA导入大肠埃希菌最常用方法是()
供体,受体和()是重组DNA技术的三大基本元件。
在基因工程中,切割载体和含有目的基因的DNA片段中,需使用()
Fredrick 和 McClarin等用一个由 13 个碱基对的 DNA片段与 EcoRI、反应,然后分离到酶和 DNA 共结晶的复合物,通过 X射线分析发现了什么?
用限制性内切核酸酶 HaeⅢ分别切割载体 DNA 和供体 DNA 后,可用 E.coli DNA连接酶进行连接。
限制性核酸内切酶,简称限制酶,是一类能识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列,并在识别序列内或附近切割DNA双链结构的核酸酶。限制性核酸内切酶切割DNA后不会产生()
某种线性DNA含有限制性核酸内切酶EcoRI的1个酶切位点。该DNA样品(甲)经EcoRI酶切后,在DNA连接酶催化下形成产物乙。则反应液中产物乙共有()
用不同的产生黏性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源 DNA,得到的黏性末端是不亲和的黏性末端。
重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括:分(目的基因的分离)、切(限制性内切酶切割目的基因和载体)、接(目的基因和载体连接)、转(连接产物导入受体细胞)、筛(筛选阳性重组子)。重组DNA技术中最常用的筛选方法是()
某学生在用 EcoRI切割外源 DNA片段时,出现了星号活性,请分析可能的原因?
用 EcoRI和 HindⅢ分别切割同一来源的染色体 DNA,并进行克隆,在前者的克隆中筛选到 A基因,但在后者的克隆中未筛选到 A基因,请说明原因。
如果用EcoRI酶切DNA时出现星活性,试分析原因?
Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小.一般在 20~40kDa,通常由()亚基所组成。它们的作用底物为双链 DNA,极少数Ⅱ类酶也可作用于单链 DNA,或 DNA/RNA 杂合链。这类酶的专一性强,它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求,而且对更远的碱基也有要求,因此,Ⅱ类酶既具有()专一性,也具有()的专一性,一般在识别序列内切割。切割的方式有(),产生()末端的DNA片段或()的DNA片段。作用时需要()作辅助因子,但不需要()和()。
同尾酶切割DNA产生的末端是相同的,且是对称的。
用限制性内切核酸酶切割载体、供体 DNA后,要加入 EDTA-SDS中止液使限制性内切核酸酶失活,这样有利于重组连接。
转化过程中,受体菌所整合的供体DNA是()。
用一限制性内切核酸酶切割 Lac+Tetr的质粒载体,已知该酶识别的是4个碱基序列,并产生有两个碱基突出的单链末端,该酶在 lac 基因内有切割位点,并在第二个氨基酸密码子内,该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后,用 DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端,然后重新连接成环,转化 Lac-Tets受体菌,筛选 Tet 转化子,问:Lacr的基因型是什么?并说明原因。
某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时,出现了星号活性,请分析可能的原因?
用同一种酶切割载体和外源 DNA得到黏性末端后,为防止它们自身环化,要用 CIP将它们脱磷酸。
限制酶切割DNA后产生的切口有()、()和()三种形式。
限制性核酸内切酶切割DNA时可产生:
限制性核酸内切酶切割 DNA 后产生
限制性核酸内切酶切割双链DNA后产生特殊末端,即 末端和 末端。