限制性内切核酸酶 BglⅡ识别的序列为 A GATCT,BamHI 识别的序列为 GGATCC,用它们分别切割载体 DNA和供体 DNA,不必使酶失活,就可以直接通过黏性末端连接法进行连接。
用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接,连接产物会含大量自身环化载体,采用下列哪种酶处理,可防止自身环化()
取代型载体(replacement vector)是指同一种限制性内切核酸酶在),DNA 中具有两个切点,外源 DNA通过取代这两个切点间的片段被克隆。
如果用限制性内切核酸酶切割双链 DNA 产生 5,突出的黏性末端,则可以用();进行 3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割 DNA 产生的是 3’突出的黏性末端,可以用()进行 3’末端标记。
用λ噬菌体作克隆载体时,外源DNA片断越小,克隆的成功率越高。
pBR322可以用于黏性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接,无论用哪种方法连接,都可以用同一种酶回收外源片段。
T4DNA连接酶和 E.coli 连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接。
用限制性内切核酸酶 HaeⅢ分别切割载体 DNA 和供体 DNA 后,可用 E.coli DNA连接酶进行连接。
用不同的产生黏性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源 DNA,得到的黏性末端是不亲和的黏性末端。
用限制性内切核酸酶切割载体、供体 DNA后,要加入 EDTA-SDS中止液使限制性内切核酸酶失活,这样有利于重组连接。
用 Sal I切割从噬菌体 J2 分离的DNA时,得到 8 个片段,分别是:1.3、2.8、3.6、5.3、7.4、7.6、8.1 和11.4kb。但是,用 SaI I 切割从被感染的寄主细胞中分离到的 J2 噬菌体DNA 时,只得到 7 个片段,分别是:1.3、2.8、7.4、7.6、8.1、8.9 和 11.4kb,根据这些结果,您得到哪些信息?
同一种限制性内切核酸酶切割靶 DNA,得到的片段的两个末端都是相同的。
载体是能携带目的基因进入宿主细胞,实现外源DNA的无性繁殖,或表达有意义的蛋白质的一类DNA分子,是重组DNA技术中一个重要的工具。人工构建的含有噬菌体DNAcos序列和质粒载体复制子序列的特殊类型的载体称为()
如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多,可能原因是()
在酵母菌细胞内()和()中都含有DNA,后者可以做为外源DNA片断载体,()用于遗传工程研究。
用一限制性内切核酸酶切割 Lac+Tetr的质粒载体,已知该酶识别的是4个碱基序列,并产生有两个碱基突出的单链末端,该酶在 lac 基因内有切割位点,并在第二个氨基酸密码子内,该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后,用 DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端,然后重新连接成环,转化 Lac-Tets受体菌,筛选 Tet 转化子,问:Lacr的基因型是什么?并说明原因。
用相同的限制性内切酶切割DNA留下的粘性末端是一定()的;用不同的限制性内切酶切割DNA留下的粘性末端一定是()的。
DNA重组的顺序是()①用连接酶将外源DNA与载体连接。②培养细胞以扩增重组DNA。③通过转化将重组DNA引入受体细胞。④筛选出含有重组体的克隆。
为提高重组转化效果,对同一种酶切后载体进行()处理。
目的基因和载体的互补末端一定是用同一种限制性核酸内切酶切割产生
限制性核酸内切酶切割双链DNA后产生特殊末端,即 末端和 末端。
用同一种限制性核酸内切酶切割载体和目的基因后进行连接,采用下列哪种酶处理,可防止载体自身环化( )
外源基因必须插入到克隆载体或表达载体中,形成具有自主复制起点的“重组DNA分子”后才能导入宿主细胞。
选择在12℃~16℃之间用DNA连接酶进行黏性末端连接反应,是为了达到什么之间的平衡()?